板蓝根多糖对鸡新城疫抗体滴度和免疫器官的影响 摘要：目的：研究板蓝根多糖于与ND疫苗配合使用，对鸡新城疫苗免疫雏鸡血清抗体效价和免疫器官指数的影响。方法：150只14日龄蛋公鸡随机分为3组，板蓝根多糖高、低剂量组，对照组，各组50羽，同时设5个重复，每个重复10羽，14日龄用新城疫Ⅳ系弱毒苗点眼滴鼻免疫;同时板蓝根多糖高剂量组(12.3mg·mL- 1)、低剂量组(6.17mg·mL- 1)分别肌肉注射板蓝根多糖0.3mL/羽，对照组注射等量生理盐水，每天1次，连续三天;免疫后7、14、21、28、35、42d随机取8只翼下静脉采血后分离血清，检测鸡新城疫HI抗体效价;并于免疫后14、21、28、35、42d随机取4只放血致死后称重，摘取脾脏、胸腺、法氏囊称重，计算免疫器官指数。结论：大多数试验组鸡的抗体效价与免疫器官指数都显著高于对照组，而且，低剂量组高于高剂量组。 关键词：板蓝根多糖;抗体;免疫器官Abstract: Objection: To study the effection istais root polysaccharide (IRPS) and ND vaccine on NDV HI antibody titer and immune organ.Methods:150 chickens were randomly divided into 3 group , istais root polysaccharide(IRPS) at high and lose group, in control group, each group were 50 chickens, at the same time, each group there are five repetitions, each repetition includes 10 chickens, vaccinated with NDV-IV vaccine at 14 day; At the same time, the chickens in experimental group were intramuscularly injected respectively istais root polysaccharide(IRPS) 0.3ml, in control group,physiological saline,once a day for three successive days; on days 7 , 14, 21,28, 35, 42 after vaccination ,8 chickens’ blood were sample randomly from each group for determination of serum HI antibody titer by micro-method; on days 14, 21, 28, 35, 42 after vaccination, 4 chickens’ weight of whole body, spleen 、thymus and bursa were weighted randomly from each group for calculation of immune organ index.Conclusion:The result showed that most of experimental group chickens’ HI antibody titer and immune organ index both significantly higher control group, also lose group higher high group. Key word:istais root polysaccharide(IRPS); antibody titer; immune organ 鸡群接种新城疫疫苗后，有时还会出现新城疫病例，其主要原因是疫苗保护率低和某些免疫抑制因素所致。研究表明，一些细胞因子能增强免疫反应，如白介素-2已作为一种新型基因工程免疫增强剂而被广泛研究。许多中药成分与疫苗合用，可以增强机体的非特异性或特异性免疫应答，使抗体在血液中或粘膜表面维持更长时间，发挥持久的免疫效果，提高机体的抗病。板蓝根多糖是板蓝根中的天然有效活性成分，具有促进机体免疫功能，增加白细胞和淋巴细胞数量，增强淋巴细胞有丝分裂反应，提高淋巴细胞转化率和巨噬细胞活性，诱生干扰素等作用，是较强的免疫刺激剂。对利用板兰根多糖的免疫增强作用，与ND疫苗配合使用，来探讨板蓝根多糖对鸡新城疫苗免疫雏鸡血清抗体效价和免疫器官指数的影响，旨在研制出一种高效中草药免疫增强剂，以提高鸡对NDV的免疫力，同时也为今后中西复方免疫增强剂的研究提供理论依据。 1试验材料 1.1 板蓝根多糖(多糖纯度为27%)，由微生物试验室提供。 1.2 疫苗 新支二联弱毒苗、新城疫(NDV-IV)弱毒苗、新支二联油苗;鸡新城疫HI 测试抗原(由微生物实验室提供)。 1.3 主要试剂 Alsever's血球保存液配制 准确称取葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、氯化钠0.42g，溶解于800mL双蒸水(双蒸水指的是经过二次蒸馏的水，一般用于实验，但不能喝，因为其中对人体有益的钙镁离子已经被破坏)中，以0.1%柠檬酸溶液调节pH为7.2，然后定容至1000mL。用0.22μm滤膜过滤，再以108℃高压蒸汽灭菌15分钟，4℃保存。 1.4 鸡红细胞悬液的制备 采集鸡外周血5mL，转移到20mLAlsever's血球保存液中，4℃保存(保存时间不超过一周)。临用前，以生理盐水洗涤3次，每次洗涤后以2000rpm离心5min。最后用生理盐水调节红细胞悬液浓度为1%。 2试验方法 2.1 动物分组及处理 1日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡150只(购自孵化厂)，随机均分为2个试验组和对照组，每组50只，同时设5个重复，每个重复10羽，14日龄(平均母源抗体效价4.5 )时用一羽份的新支二联弱毒苗点眼滴鼻，板蓝根多糖加去离子水稀释成不同的浓度，同时高剂量组肌肉注射12.3mg.mL- 1板蓝根多糖溶液0.3mL/羽，低剂量组肌肉注射6.17mg.mL- 1板蓝根多糖溶液0.3mL/羽，对照组肌肉注射生理盐水0.3mL/羽，每天1次，连续三天，24日龄用一羽份的新城疫Ⅳ弱毒苗二免，同时肌肉注射新支二联油苗，0.3mL/羽。 分别于免疫后第7( D7)、14 (D14)、21(D21) 、28( D28) 、35(D35)和42(D42)天每组随机抽取8羽，翼下静脉采血，分离血清，用β-微量法检测血凝抑制(Hemagglutination inhibition，HI)抗体效价;于免疫后14 (D14)、21(D21) 、28( D28) 、35(D35)和42(D42)天每组随机抽取4羽称重，剖杀，摘取胸腺、脾脏和法式囊并称重，计算免疫器官指数(免疫器官重量/体重×100%)。 2.2 鸡血清新城疫抗体效价检测 2.2.1 4单位抗原的滴定 在96孔微量血凝板上，从左到右每孔各加50μL PBS液，另加一排作为重复。再向每排的第1孔加入50μL新城疫尿囊液，依次向后倍比稀释直至第11孔，第12孔作为对照，无抗原液;然后向每孔加入50μL 1%鸡红细胞悬液，将微量板在微量振荡器上震动混匀后置于37℃温箱中感作30min，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。 结果判定，孔内红细胞呈拉网状为凝集，呈圆点状沉于孔底为沉淀。以100%凝集的抗原最大稀释孔为该抗原血凝价，即一个凝集单位;从该孔向前移2孔的抗原稀释度作为4单位抗原的稀释度。 2.2.2 样品的检测 采用血凝抑制实验检测样品的抗体效价，在96孔微量血凝板上，从左到右每孔各加50μL PBS液，再向每排的第1孔加入50μL待检血清，依次向后倍比稀释直至第12孔，然后向每孔加入50μL 4单位抗原，在微量振荡器上振荡混匀后置于温箱中感作20min。取出向每孔加入50μL 1%鸡红细胞悬液，同时设阳性血清、阴性血清及空白对照空。振荡混匀后置于37℃温箱中感作30min，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。 结果判定，以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的抗体滴度，每组以8只鸡血清抗体滴度的平均值表示该组的抗体水平。 |
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