也求饲料淀粉糊化度的测定方法

lhwqq_71

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ljs3611

张丽英老师编的《饲料中分析及饲料质量检测技术》一书中有，不过我没有电子版的，呵呵，没法给你写了，你可以去网上找找

sunmy888

熟化度的测定
1设备
天平，灵敏度0.001g；
恒温水浴；
分光光度计。
2试剂
缓冲液：将3.7ml冰醋酸和4.1g无水乙酸钠（或6.8gNaC2H3O2.3H2O）溶于100ml蒸馏水中，定容至1立升，必要时可滴加乙酸或乙酸钠调整pH值至4.5±0.05.
酶溶液：将750ml脱支酶（amyloglucosidase,No.A-7255,浓度12100单位/g）溶于50ml蒸馏水。此溶液含粗制酶15mg（或180单位/ml）。测试当天配制。
蛋白质沉淀剂：1、ZnSO4.7H2O,10%（w/v）蒸馏水溶液；2、0.5N NaOH。
铜试剂：将40g无水Na2CO3溶于大致400ml蒸馏水中，加7.5g酒石酸，溶解后加4.5g CuSO4.5H2O。混合并稀释至1立升。
磷钼酸试剂：取70g钼酸和10g钨酸钠，加入400ml10%NaOH和400ml蒸馏水。煮沸20-40min以驱赶NH3。冷却，加蒸馏水至大约700ml，加250ml浓的正磷酸（85%H3PO4），用蒸馏水稀释至1立升。
葡萄糖标准液：溶解100mg纯葡萄糖于70ml蒸馏水中，稀释至100ml。测试当天配制。
3操作步骤
1.先将风干样品细磨碎使全部通过1mm筛。再根据样品含淀粉程度不同，准确称取两份样品各100mg（纯淀粉）、或各150mg（样品淀粉含量60%以上）、或各200mg（样品淀粉含量30-60%）、或各300mg（样品淀粉含量15-30%）、或各400mg（样品淀粉含量15%以下），分别置于25ml刻度试管内。其中一份供制备“全糊化样品”。用自来水冷却试管，滴加适量蒸馏水使液面恢复到加热前的位置。与“测定样品”一起进行以下步骤。
2.向“测定样品”中加入15ml缓冲液。分别向“全糊化样品”与“测定样品”中加入1ml酶溶液。另取一空试管加入15ml缓冲液和1ml酶溶液，做为“空白”。在40℃水浴中保温1h，起初摇动一次，以后每15min摇动一次。
3.保温达1h时，加2ml 10% ZnSO4.7H2O，混匀，再加1ml 0.5N NaOH。用水稀释至25ml，混匀，过滤（用Whatman#40滤纸）。
4.准确吸取0.1ml滤液和2ml铜试剂，置于25ml刻度试管中。
5.将该试管置沸水浴中6min，保持沸腾，加2ml磷钼酸试剂，继续加热2min。
6.用自来水令试管冷却。加蒸馏水稀释至25ml，堵住试管口（可用手套的拇指或手掌），反复颠倒试管使之混匀。
7.用分光光度计在420nm读取吸收值。
8.测定样品淀粉糊化（熟化）度的计算：
糊化（熟化）度（%）=（测定样品光吸收-空白光吸收）/（全糊化样品光吸收-空白光吸收）*100%
如要得知样品的葡萄糖释放量和淀粉含量，则需增加以下步骤：
9.建立葡萄糖标准曲线：吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml标准葡萄糖溶液（1mg/ml）分别置于各有2ml铜试剂的试管中。按第4至第7步骤得出葡萄糖标准曲线。当样品称取量为200mg时，这些试管分别代表每克样品含葡萄糖0、125、250、375、500、625、750mg的浓度。
10. 样品葡萄糖释放量和淀粉含量的计算：
样品葡萄糖释放量（mg/g）=(测定样品葡萄糖值*-空白葡萄糖值*)*200/称取样品量（mg）
样品淀粉含量（mg/g）=（全糊化样品葡萄糖值*-空白葡萄糖值*）*0.9*200/称取样品量（mg）
（*根据光吸收从葡萄糖标准曲线查找）。

ljs3611

楼上是美国大豆协会熊博士根据美国化验方法简化的一个简易方法啊

sunmy888

4# ljs3611
我们实验室就是采用这个方法来做的。

ljs3611

是的，我们也用过，不过还是用哪种方法的时候多，呵呵 5# sunmy888

glory143

引用自ljs3611 发表于 2009-7-14 15:19的内容
是的，我们也用过，不过还是用哪种方法的时候多，呵呵 5# sunmy888

脱支酶现在还有的买吗???SIGMA不是已经停产这个酶了吗?

glory143

B淀粉酶各位都是哪里买的啊 ??好象质量差异很大啊

水本无味

糊化度测得都不怎么准确,怎么保证准确啊

poplar

我正准备用这个方法，请问，脱支酶在哪买呢？我还没找到，我在上海，
在线等，谢谢了 ！