发酵豆粕各项指标检测方法与标准

wlins · 发表于 2008-11-27 14:58:43

发酵豆粕各项指标检测方法与标准
1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。
2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。
3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。
4、可溶蛋白的测定方法
5、小肽含量的测定
　　　　　　　　　　　水份的测定

水份测定直接参见国标
测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。
水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。
　　　　　　　　　　　总有机酸检测

试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂
仪器:磁力搅拌器离心机
方法：
（1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。
（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。
（3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。（终点到溶液呈现粉红）
计算
乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15g
N(NaOH):NaOH标准溶液的浓度；
V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积；
0.09008：乳酸的毫克当量。
0.1mol氢氧化钠的配制与标定
1、配制：称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管虹吸5ml的上清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。
2、标定
称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。
3、计算
氢氧化钠标准溶液的浓度按下式计算
c（NaOH）=m/（V1-V2）×0.2042
式中       c（NaOH）——氢氧化钠标准溶液之物质的量的浓度，mol/l；
               V1——滴定用邻苯二甲酸氢钾之用量，ml；
               V0——空白试验氢氧化钠溶液之用量，ml；
               m——邻苯二甲氢钾之质量，g；
   0.2042——与1.00ml氢氧化钠标准液[c（NaOH）=1.000mol/l]相当的以克表示的邻苯二甲氢钾之用量。
0.1％酚酞指示剂的配制：称取1.000克酚酞，溶解与100ml95％的试剂酒精中，混匀即得。
　　　　　　　　　　　乳酸测定

称取样品10g与50ml的烧杯中，移取30ml去离子水，在磁力搅拌器上搅拌30min，在3000r/min离心10min，取上清液利用气相色谱或液相色谱测定乳酸含量。　　　　　　　　　　　
pH的测定

称取样品10g与50ml的烧杯中，移取15ml去离子水，搅拌30min，用 pHS-3C型pH计测定溶液的pH值。
或者用精密pH试纸测试。
　　　　　　　　　　可溶性蛋白的测定
根据AOCSBa11-65测定蛋白质溶解指数的方法
称取20g样品于300ml的匀浆杯中、量取50ml 37＋1℃的去离子水于匀浆杯中，将匀浆杯放在37℃的水浴中，浸泡搅拌5min，在内切式组织匀浆机上匀浆10min，从匀浆杯中取出浆液移入600ml烧杯中，待浆液分层后，移出40ml上清液注入50ml离心管中，并在2700r/min的转速下离心10min，移取15ml上清液于凯氏烧瓶中，测定上清液中蛋白质含量和样品总蛋白含量，计算溶解可溶性蛋白质的数量。
　　　　　　　　　　小肽含量测定方法

三氯乙酸（TCA）法
三氯乙酸法的原理是利用大分子的蛋白质在TCA溶液中沉淀，除去酸不溶蛋白质，然后测定酸溶蛋白含量。国外大量资料表明在蛋白质酶水解的研究中测定水解度，通常在酶解液中加入TCA溶液，是为水解的大分子蛋白质沉淀，而与小分子的酸溶蛋白成分，即肽类和FAA离开，测定酸溶蛋白占总蛋白的含量，求得水解度，即酸溶蛋白占总蛋白的百分比。
粗蛋白≥50％    小肽（1000d以下）≥10％
乳酸≥3.5％    水分≤10％
钙 0.5－0.54％总磷≥0.74％
/gm益生菌≥20亿/克蛋白酶≥150
粗脂肪≤5.0％    粗纤维≤3.0％
无氮浸出物≤28％  粗灰分≤6.0％
猪消化能（kcal/kg）3980
猪代谢能（kcal/kg）3600
猪净能（kcal/kg）2320
禽代谢能（kcal/kg）2570
鱼消化能（kcal/kg）3200
奶牛净能（kcal/kg）1090

项目
含量
天门冬氨酸Asp 5.42%
赖氨酸Lys       3.03%
蛋氨酸Met       0.65%
苏氨酸Thr       2.05%
精氨酸Arg       3.50%
甘氨酸Gly       2.25%
丝氨酸Ser       2.43%
异亮氨酸Ile       2.21%
苯丙氨酸Phe       2.37%
缬氨酸Val       2.36%
组氨酸His       1.24%
谷氨酸Glu       9.84%
丙氨酸Ala       2.30%
脯氨酸Pro       2.04%
色氨酸Trp       0.50%
亮氨酸Leu       3.76%
发酵豆粕与普通豆粕、膨化豆粕比较

项目/种类	豆粕	膨化大豆	发酵豆粕
工艺	压榨/浸提	热加工	发酵、酶解
粗蛋白%	44	36	50
粗纤维%	6-7	5	5
粗灰分%	6.5	5	6
酸碱度	7.0	7.0	4.0-4.8
细胞壁破裂	没有破壁	部分破壁	100%破壁
小分子蛋白含量%	11.0	9.0	22
胰蛋白酶抑制剂	5-10mg/Kg	5-20mg/Kg	1mg/Kg
脲酶mg/Kg	0.4	/	<0.02
棉子糖水苏四糖	12-15	9-12	<0.05
大豆球蛋白ppm	高	高	<10
半球蛋白ppm	高	高	<1
外源凝集素ppm	100-300	100-300	<1
气味	豆腥味	豆腥味	发酵香味
颗粒度	大颗粒	大颗粒	细粉
流散性	中等	不好	佳