不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验

哈中活菌

免疫调节剂是用于调节和控制免疫功能的药物，包括免疫抑制剂和免疫增强剂。免疫增强剂是一类单独使用或与抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质，可增强机体的
免疫功能，缓解由环境造成的免疫功能紊乱，有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。目前在临床上常用的免疫增强剂有黄芪多糖、卡介苗、盐酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白细胞介素-2（白介素-2）等。本试验选用黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC作为免疫增强剂，以探明不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫免疫效果的影响。
1 材料与方法
1.1 试验动物
    1 日龄健康海兰褐蛋鸡，购于泰安东岳种禽有限公司。
1.2 试验材料
    96 孔V 型微量反应板、移液器、生理盐水、1%鸡红细胞悬液。
    新城疫血凝抑制试验抗原由中国科学院提供；鸡新城疫灭活疫苗（La Sota 株）购于乾元浩生物股份有限公司。
    黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康养殖工程中心提供。
    RPMI 1640 培养液（Gibco 公司）；CKK-8、刀豆蛋白A（ConA，Sigma公司）。
    小牛血清、Hank′s液、台酚兰、肝素钠。
1.3 试验动物的处理
    600 只健康海兰褐蛋鸡随机分为A、B、C、D、E 5 组，每组120 只。试验在相同的环境下，采用同种饲料进行饲喂和同一防疫程序进行免疫预防。50 日龄防疫新城疫Ⅳ系和新城疫灭活疫苗时，免疫增强剂在防疫前后（48~52 日龄）连用5 d。A 组使用预防量的黄芪多糖粉剂，B 组盐酸左旋咪唑10 mg/kg 拌料，每天早晚各一次，C 组VE 80 mg/kg 拌料，D 组VC 100 mg/kg 拌料，E 组不加免疫增强剂，作为对照组。
1.4 抗体水平检测
    分别于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每组随机抽样15 只鸡翅静脉采血，分离血清，采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）（《高致病性禽流感诊断技术》中华人民共和国国家标准GB/T 18936-2003）检测抗体效价，计算每组平均值，结果以log2表示。
1.5 ConA诱导的鸡血液T淋巴细胞转化试验
    分别于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每组随机抽取15 只鸡翅静脉采取抗凝血，将1.5 mL 抗凝血与1.5 mL 细胞培养液（1640，不含胎牛血清）混匀；在灭菌离心管中加入3 mL 淋巴细胞分离液，并将3 mL 混匀血液轻轻的平铺在淋巴细胞分离液表面，1 500 r/min 离心20 min；将离心分层的淋巴细胞吸出，转到1.5 mL 离心管中，加入细胞培养液（1640，不含胎牛血清）重悬，3 000 r/min 洗涤两次；将淋巴细胞悬浮于1640 细胞培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为1×107个/mL。将调整好的细胞悬液加入96 孔细胞培养板，每孔加99 μL，然后实验组加入1 μL ConA（终浓度为10 μg/mL），对照组加入1 μL 细胞培养液（1640，含胎牛血清），空白对照加入100 μL 细胞培养液（1640，含胎牛血清）。每个样品作两个平行。将铺好的96 孔细胞培养板放入5%CO2，37 ℃培养箱中培养48 h；每孔加入终浓度10 μL CCK-8，放入二氧化碳培养箱，孵育1 h 后用酶标仪（OD450）读数，并计算刺激值。