快速测定大豆制品中的尿酶活性
方法一:尿素— 苯酚红法(美国大豆协会)
1 原理
尿素酶活性是大豆饼粕类加工正确与否的标志,它的活性的高低与大豆饼粕加工(热)程度有直接关系,此方法是在指示剂苯酚磺存在的条件下,按尿素转变成氨的方法定性测定豆粕中尿素酶的活性。
2 试剂
(1)0.1mol/L硫酸(将6ml浓硫酸缓缓注入1000ml水中)
(2)0.2mol/L氢氧化钠:取0.8g氢氧化钠加蒸馏水,溶解成100ml
(3)尿素— 苯酚红(别名:酚磺肽、酚红)试剂:将 1.2g苯酚红溶于30mL0.2mol/L氢氧化钠溶液中,用蒸馏水稀释至300mL;加入90g尿素并溶解之,用蒸馏水稀释至 2L;加 70mL0.1mol/L硫酸;稀释至3L。
注意:配好的溶液应具有明亮的琥珀色,若溶液转变成桔红色时,应滴加0.1mol/L硫酸,调至呈琥珀色,试剂最好在试验前配制,现配现用。尿素—苯酚红试剂有效期仅90天。
3.测定方法
(1)取粉碎好的豆粕,均匀地平铺于培养皿中(注意铺薄薄一层)。
(2)用滴管吸取尿素— 苯酚红试剂,小自心滴在被测定的样品中,将培养皿中豆粕全部浸湿。
(3)放置5分钟后观察结果:
①没有任何红点出现,再放置25分钟,若还无红点出现,说明没有尿素酶活性,是豆粕加工过熟了。
②有少数红点,为少量尿素酶活性,豆粕可用。
③豆粕表面有25%的红点覆盖,有少量尿素酶活性,可用。
④豆粕表面出现50%的红点覆盖,尿素酶活性大,应慎用。
⑤豆粕表面的 75%一100%为红点覆盖,尿素酶活性很高,说明豆粕过生,无法使用。
思考下:配制尿素苯酚红溶液时,硫酸的量能否多用或少用?为什么? 整个检测过程会发生怎样的化学反应? |
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