绵羊肺腺瘤病特异性PCR及套式PCR诊断方法的建立

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绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis, OPA )又名“驱赶病”（Jaagsiekte），是引起绵羊肺脏肿瘤的一种接触性传染病，也发生于山羊。主要病征为患羊咳嗽、呼吸困难、消瘦、大量浆液性鼻漏、Ⅱ型肺泡上皮细胞和无纤毛细支气管上皮细胞肿瘤性增生[1,2,3]。OPA 与人的细支气管-肺泡癌( bronchiolo-alveolar carcinoma, BAC) 在临床症状、病理组织学特征及超微病变方面极为相似，为人类这一常见癌症提供了研究模型[4]。
     本病1825年首次发现于南非。绵羊感染率40％～80％，发病率2％～30％，出现明显临床症状的羊病死率为100%[5]。1958年邓普辉教授首次报道了我国屠宰羊群中的11个OPA病例[6]，以后，新疆、内蒙古、青海等省区陆续有本病的报道[7]。现在，多数养羊业发达的国家和地区都有该病的发生和流行，该病严重威胁和影响着世界各国养羊业的发展。
     绵羊肺腺瘤病病毒（Jaagsiekte retrovirus, JSRV）为β反转录病毒。基因组为线性单股正链RNA，全长7.4kb，编码相互重叠的gag、pro、pol、env基因[8]，JSRV感染羊后，形成整合有外源性前病毒DNA(exJSRV)的肺肿瘤细胞。有趣的是，健康羊基因组携有15～20拷贝，与JSRV密切相关的内源性病毒DNA（enJSRV）。enJSRV是几百万年前，JSRV形成前病毒DNA整合入羊生殖细胞，在羊与病毒漫长的共进化过程中固定下来，随宿主细胞基因组遗传复制并发挥一定的生理功能[9]。健康羊体内，enJSRV表达的蛋白与JSRV 病毒粒子的蛋白高度一致，能与JSRV的受体结合，竞争性阻断JSRV的感染，并导致免疫耐受，使得感染羊无针对JSRV的循环性抗体。然而，患羊肺组织﹑淋巴网状内皮系统及外周血单核细胞均有前病毒DNA及JSRV的转录产物[4]。目前，我国对本病依赖于常规病理学诊断方法，尚无快速、特异、灵敏的实验室诊断方法。本实验针对病原或前病毒进行实验设计，通过对比enJSRV与exJSRV的序列差异，设计了两套引物，成功排除了高拷贝数enJSRV的干扰，在国内首次建立了针对exJSRV长末端重复序列（long terminal repeat, LTR）的特异性PCR及套式PCR诊断方法[10]，可用于不同条件下的诊断检测，对我国绵羊肺腺瘤病的诊断、流行病学调查及监控种羊的进口具有重要价值。

guangyaoxinyu

太高科技了。