玉米蛋白粉总叶黄素含量一般多少？

whm0728 · 发表于 2009-10-27 15:57:42

饲料中叶黄素的测定
1 检测依据美国分析化学协会饲料中叶黄素的测定
2 检测方法
2.1  仪器及器皿
2.1.1 粉碎机、筛孔0.4毫米
2.1.2 分析天平、感量0.0001g
2.1.3 水浴—恒温无搅拌水浴。温差不大于+05℃。水容量约10升，水深为7cm。
2.1.4 空气凝结装置---2毫米×49厘空心玻璃管，其上有一个单孔的橡胶塞。
2.1.5 真空烤箱（为制备标准品用）
2.1.6 容量瓶---100ml、50ml棕色容量瓶
2.1.7 移液管---30ml、10ml移液管
2.1.8 72型分光度计
2.1.9 有刻度的容量管（1000毫升，作配制试剂用）
2.2 试剂
2.2.1 丙酮、分析纯
2.2.2 正乙烷、分析纯
2.2.3 甲苯、分析纯
2.2.4 无水酒精、分析纯
2.2.5 甲醇、分析纯
2.2.6 甲醇氢氧化钾溶液—40%  。40克KOH溶于100毫升甲醇中
2.2.7 提取剂。正乙烷—丙酮—无水酒精---  甲苯（10：7：6：7）
2.2.8 硫酸钠溶液10%。10克无水硫酸钠溶于100毫升蒸馏水中
2.2.9 异丙醇，分析纯
2.2.10丙酮—异丙醇（1+1，容积）
2.2.11 苏丹I标准溶液
2.3 试剂制备
2.3.1 苏丹I标准溶液
1) 储备液---1.0毫摩尔（mM）。
用热乙醇再次结晶的标准品。标准品在摄氏70度真空烘干箱里烘至恒重。
溶解0.1241克醇标准品于500毫升丙酮—异丙醇（1+1，容积）中，贮存于室内避光处，每月制备一次。再次结晶的步骤如下：将8克重的苏丹I结晶放入500毫升的烧杯中，加入300毫升乙醇，并加温至摄氏75度，不断搅拌。应在烧杯口放置一凹玻片以防止过多的蒸发。当所有的固体接近完全溶解时（有时会有一些不溶的杂质），应用真空过滤，除去杂质。热的滤出液应再温慢慢冷却（可用冷箱，冷却温度>℃）。此时不要搅拌滤出液，因为这将产生小结晶。一符结晶产生后，再次进行过滤。结晶体应尽量用压法干燥。最后，用小产铲移至干燥玻片上，并置于70度的真空烘箱。结晶完全干燥后贮藏于棕色的干燥器皿中。
2) 工作液---0.04毫摩尔
稀释2ml储备液溶于50毫升丙酮-异丙醇（1+1，容积）中，贮存于室内暗处，每天制备一次。
2.4  仪器校正
首先，以工作液在469-479nm 间以1nm间隔扫描，检查校正分光光度计。若最大吸收不是474nm，则重校仪器。当仪器在474nm下有最大的吸光值时，狭缝宽度为0.03下，工作液读数应为0.561（474nm）。
若仪器有偏差，便要校正下面方程式中的仪器偏离因子
f（仪器偏离因子）=0.561/A474（工作液）
A474（工作液）=工作液474nm的吸光值
2.5 样品的制备
用粉碎机打碎样品（约100克至200克重），以至99%以上样品能通过40目筛。这一过程应不至于使样品的温度超过室温。样品碾碎后，应进行一次彻底地混均。准确地称取样品（玉米2g、蛋白粉05g、饲料2g），放入100毫升棕色容量瓶中，加入30毫升提取剂，密封，用手摇约一分钟，然后，再加入2毫升40%甲醇一氢氧化钾溶液，并摇动1分钟。瓶口上插上一支玻管后置于56度水浴中保持20分钟，然后把容量瓶移入暗处入置一小时。加入30毫升正乙烷，摇动一分钟，用10%硫酸钠溶液稀释至刻度，剧烈摇动一分钟后，再置放于暗处一小时。上层液体积约为50毫升。
用移液管吸取上清液5毫升入50毫升棕色容量瓶中，用提取剂定容至刻度，摇匀。以提取剂作空白，测定474nm的吸光度，并记录。
2.6 计算结果
   叶黄素（克/公斤）=[A474×f×2.1205] / 样品重量（克）