饲料中粗蛋白检测

wenlichun2009

GB/T6432—94饲料中粗蛋白测定方法

本标准参照采用ISO 5983—1979 《动物饲料──氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。

1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。

　　本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

2 引用标准

　　GB 601　化学试剂　滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备

3 原理

　　凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。

4 试剂

4.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98％，无氮。

4.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。

4.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。

4.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。

4.5 混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。

4.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。

4.6.1
盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。

4.6.2
盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。

4.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。

4.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。

4.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。

5 仪器设备

5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。

5.2 分样筛：孔径0.45mm（40目）。

5.3 分析天平：感量0.0001g。

5.4 消煮炉或电炉。

5.5 滴定管：酸式，10、25mL。

5.6 凯氏烧瓶：250mL。

5.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。

5.8 锥形瓶：150、250mL。

5.9 容量瓶：100mL。

5.10 消煮管：250mL。

5.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。

6 试样的选取和制备

　　选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

7 分析步骤

7.1 仲裁法

7.1.1
试样的消煮

　　称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶（5.6）置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。

7.1.2
氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A）

7.1.2.1 常量蒸馏法

　　将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶（5.6）中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶（5.6），使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

7.1.2.2 半微量蒸馏法

　　将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶（5.8）内。蒸汽发生器 （5.7）的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置（5.7）的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶（5.8）使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

　　注：7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近，可任选一种。

7.1.2.3 蒸馏步骤的检验

　　精确称取0.2g硫酸铵（4.8），代替试样，按7.1.2或7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

7.1.3
滴定

　　用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L（4.6.1）或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

7.2 推荐法

7.2.1
试样的消煮

　　称取0.5～1g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（仪器自备）
或6.4g混合催化剂（4.2），12mL硫酸（4.1），于420 ℃下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。

7.2.2
氨的蒸馏

　　采用全自动定氮仪（5.11）时，按仪器本身常量程序进行测定。

　　采用半自动定氮仪（5.11）时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸（4.4）为吸收液，加入2滴混合指示剂（4.5），蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3）进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。

7.2.3
滴定

　　用0.1mol/L的标准盐酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

8 空白测定

　　称取蔗糖0.5g，代替试样，按第7章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液（4.6.1）的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液（4.6.2）体积不得超过0.3mL。

9 分析结果的表述

9.1 计算见下式：

粗蛋白质（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100
式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；
V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；
c──盐酸标准溶液浓度，mol/L；
m──试样质量，g；
V──试样分解液总体积，mL；
V──试样分解液蒸馏用体积，mL；
0.0140──与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。
6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。

9.2 重复性

　　每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

　　当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。

　　当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。

　　当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。

游人学子

楼主把国标拿出来分享！理解理解，先赚点论坛币！我也是！
目前听说国际上更流行杜马斯燃烧法，大家了解不？

陈立华

我们测饲料的蛋白质含量用的也是这种方法（半微量蒸馏），但有时蒸馏后反应液为黄褐色有时是浅蓝色，为什么呢？

冯春伟

杜马斯燃烧法没用过，我想方法还不止这个，最好用国标法

wenlichun2009

杜马斯原理测定总氮含量
1． 燃烧  
杜马斯燃烧法是基于在高温下（大约 900 ℃ ），通过控制进氧量、氧化消解样品的原理而进行氮测定的。燃烧生成的气体被载气 CO2 携带直接通过氧化铜（作为催化剂）而被完全氧化。此外，化合物中一定量的难氧化部分会被载气携带通过作为催化剂的氧化铜和铂混合物进一步氧化。
2． 还原
燃烧生成的氮氧化物在钨上还原为分子氮，同时过量的氧也被结合了。一个传感器用来控制最佳燃烧所需的氧气量，这可以保证氧气和钨的消耗量最少。钨的还原性是铜的4倍。
3． 净化
一系列适当的吸收剂将干扰成分如卤化氢从被检测气流中除去。随后水冷器确保将分析气流中的水蒸气除去。由于用 CO2 作载气，所以没必要吸收燃烧生成的 CO2 。
4． 检测
用一个TCD热导检测器来检测  CO2 载气流中的氮。N2 体积含量引发一种电子测量信号，通过它，再经过物质的独立校正，被测样品的氮含量就自动的计算、打印和存储起来。