棉籽蛋白粉游离棉酚的测定方法

胖猪猪

请问各位有没什么好方法测定棉籽蛋白粉的游离棉酚检测指标？:handshake

冯春伟

（规范性附录）
饲料中游离棉酚的测定方法
GB 13086－1991

本标准参照采用国际标准ISO6866－1985《动物饲料中游离棉酚和总棉酚的测定》。
OO.1　主题内容与适用范围
本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法。
本标准适用于棉籽粉、棉籽饼（粕）和含有这些物质的配合饲料（包括混合饲料）中游离棉酚的测定。
OO.2　原理
在3－氨基－1－丙醇存在下用异丙醇与正已烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。
OO.3　试剂和溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。
OO.3.1　异丙醇〔（CH3）2CHOH〕。
OO.3.2　正已烷。
OO.3.3　冰乙酸。
OO.3.4　苯胺（C6H5NH2）：如果测定的空白试验吸收值超过0.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸馏，弃去开始和最后的10％蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在0～4℃冰箱中，该试剂可稳定几个月。
OO.3.5　3－氨基－1－丙醇（H2NCH2CH2CH2OH）。
OO.3.6　异丙醇－正已烷混合溶剂：6:4（V/V）。
OO.3.7　溶剂A：量取约500mL异丙醇－正已烷混合溶剂、2mL3－氨基－1－丙醇、8mL冰乙酸和50mL水于1000mL的容量瓶中，再用异丙醇－正已烷混合溶剂定容至刻度。
OO.4　仪器、设备
OO.4.1　分光光度计：有10mm比色池，可在440nm处测量吸光度。
OO.4.2　振荡器：振荡频率(120～130)次/min（往复）。
OO.4.3　恒温水浴。
OO.4.4　具塞三角烧瓶：100、250mL。
OO.4.5　容量瓶：25mL（棕色）。
OO.4.6　吸量管：1、3、10mL。
OO.4.7　移液管：10、50mL。
OO.4.8　漏斗：直径50nm。
OO.4.9　表玻璃：直径60nm.
OO.5　试样制备
采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。
OO.6　测定步骤
OO.6.1　称取1g～2g试样（精确至0.001g），置于250mL具塞三角瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管准确加入50mL溶剂Ａ，塞紧瓶塞，放入振荡器内振荡1h（每分钟120次左右）。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗上加盖一表玻璃以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于100mL具塞三角瓶中。
OO.6.2　用吸量管吸取等量双份滤液5mL～10mL（每份约含50μg～100μg的棉酚）分别至两个25mL棕色容量瓶a和b中，如果需要，用溶剂Ａ补充至10mL。
OO.6.3　用异丙醇－正已烷混合溶剂稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样的参比溶液。
OO.6.4　用移液管吸取2份10mL的溶剂Ａ分别至两个25mL棕色容量瓶a0和b0中。
OO.6.5　用异丙醇－正已烷混合溶剂补充瓶a0至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。
OO.6.6　加2.0mL苯胺于容量瓶b和b0中，在沸水浴上加热30min显色。
OO.6.7　冷却至室温，用异丙醇－正已烷混合溶剂定容，摇匀，并静置1h。
OO.6.8　用10mm比色池，在波长440nm处，用分光光度计以a0为参比溶液测定空白测定液b0的吸光度，以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度，从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值，得到校正吸光度Ａ。
OO.7　测定结果
OO.7.1　计算公式

      X=A*1.25*1000000/amv……………………………………（1）

式中：X——游离棉酚含量，mg/kg；
A——校正吸光度；
m ——试样质量，g，
V ——测定用滤液的体积，mL；
a ——质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1•g-1•L.
OO.7.2　结果表示
每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。
结果表示到20mg/kg。

冯春伟

（规范性附录）
饲料中游离棉酚的测定方法
GB 13086－1991

本标准参照采用国际标准ISO6866－1985《动物饲料中游离棉酚和总棉酚的测定》。
OO.1　主题内容与适用范围
本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法。
本标准适用于棉籽粉、棉籽饼（粕）和含有这些物质的配合饲料（包括混合饲料）中游离棉酚的测定。
OO.2　原理
在3－氨基－1－丙醇存在下用异丙醇与正已烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。
OO.3　试剂和溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。
OO.3.1　异丙醇〔（CH3）2CHOH〕。
OO.3.2　正已烷。
OO.3.3　冰乙酸。
OO.3.4　苯胺（C6H5NH2）：如果测定的空白试验吸收值超过0.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸馏，弃去开始和最后的10％蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在0～4℃冰箱中，该试剂可稳定几个月。
OO.3.5　3－氨基－1－丙醇（H2NCH2CH2CH2OH）。
OO.3.6　异丙醇－正已烷混合溶剂：6:4（V/V）。
OO.3.7　溶剂A：量取约500mL异丙醇－正已烷混合溶剂、2mL3－氨基－1－丙醇、8mL冰乙酸和50mL水于1000mL的容量瓶中，再用异丙醇－正已烷混合溶剂定容至刻度。
OO.4　仪器、设备
OO.4.1　分光光度计：有10mm比色池，可在440nm处测量吸光度。
OO.4.2　振荡器：振荡频率(120～130)次/min（往复）。
OO.4.3　恒温水浴。
OO.4.4　具塞三角烧瓶：100、250mL。
OO.4.5　容量瓶：25mL（棕色）。
OO.4.6　吸量管：1、3、10mL。
OO.4.7　移液管：10、50mL。
OO.4.8　漏斗：直径50nm。
OO.4.9　表玻璃：直径60nm.
OO.5　试样制备
采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。
OO.6　测定步骤
OO.6.1　称取1g～2g试样（精确至0.001g），置于250mL具塞三角瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管准确加入50mL溶剂Ａ，塞紧瓶塞，放入振荡器内振荡1h（每分钟120次左右）。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗上加盖一表玻璃以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于100mL具塞三角瓶中。
OO.6.2　用吸量管吸取等量双份滤液5mL～10mL（每份约含50μg～100μg的棉酚）分别至两个25mL棕色容量瓶a和b中，如果需要，用溶剂Ａ补充至10mL。
OO.6.3　用异丙醇－正已烷混合溶剂稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样的参比溶液。
OO.6.4　用移液管吸取2份10mL的溶剂Ａ分别至两个25mL棕色容量瓶a0和b0中。
OO.6.5　用异丙醇－正已烷混合溶剂补充瓶a0至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。
OO.6.6　加2.0mL苯胺于容量瓶b和b0中，在沸水浴上加热30min显色。
OO.6.7　冷却至室温，用异丙醇－正已烷混合溶剂定容，摇匀，并静置1h。
OO.6.8　用10mm比色池，在波长440nm处，用分光光度计以a0为参比溶液测定空白测定液b0的吸光度，以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度，从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值，得到校正吸光度Ａ。
OO.7　测定结果
OO.7.1　计算公式

      X=A*1.25*1000000/amv……………………………………（1）

式中：X——游离棉酚含量，mg/kg；
A——校正吸光度；
m ——试样质量，g，
V ——测定用滤液的体积，mL；
a ——质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1•g-1•L.
OO.7.2　结果表示
每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。
结果表示到20mg/kg。