黄芪提取物中黄芪多糖检测和掺假鉴别方法探讨

和兴

黄芪提取物中黄芪多糖检测和掺假鉴别方法探讨
　　
　　无锡正大生物技术研究所武志勇朱萍
　　
　　当前随着畜牧业绿色药物、添加剂的发展，各种中药、天然植物提取物在市场上兴起，黄芪提取物就是其中一种，绿色环保，无任何毒副作用。但目前市场上各种黄芪提取物或黄芪多糖种类繁多，价格含量各异，存在掺假，以次充好现象，真伪难辨。目前市场上，有些产品在黄芪多糖原料中添加了无水葡萄糖以次充好。黄芪多糖的生产工艺一般采用水煮醇沉或膜透技术。用80%的酒精做醇沉试验，即可测试是否添加了葡萄糖。因为黄芪多糖不溶于80%的酒精，而外加的葡萄糖溶于80%的酒精。干燥方法一般有减压真空干燥，喷雾干燥，微波干燥等，因干燥方法不同，所以，粒子的细度和颜色也不同，有浅黄色和棕褐色，这与产品的质量无关。减压真空干燥法，颜色较深，细度一般为80-120目，喷雾干燥法，颜色较浅，细度好。目前使用国内的原料和生产技术。黄芪多糖的含量达到70%即为上品。无锡正大畜禽有限公司黄芪多糖均采用上好的内蒙黄芪做为原料，用先进的设备和技术，提纯而成，含量均在70%左右，水溶性好，药用价值高，产量居国内前列。笔者通过实验室检验，对黄芪多糖的含量检测和掺假的鉴别进行探讨，也业内人士共同分享，有不足之处，希望大家多指出。
　　
　　1黄芪多糖的含量测定
　　
　　黄芪多糖含量的检测在《药典》和《兽药典》均未给出检测方法，而在农业部《兽药质量标准》2003版黄芪多糖注射液中规定了黄芪多糖含量测定方法，另外在《兽药典2005版》第二部中规定了玉竹多糖的测定方法。参考以上两个标准通过多次试验，确定了以下黄芪多糖的含量测定紫外分光光度法。
　　
　　1.1对照品溶液的制备
　　
　　取在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖70mg，精密称定，置100mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
　　
　　1.2供试品溶液的制备
　　
　　精密称取本品1.0g，置250mL量瓶中，加20mL水溶解，然后加30%硫酸锌5mL，在水浴加热5分钟后，在振摇下立即加亚铁氰化钾试液5mL，冷却后加水至刻度，摇匀，滤过，弃取初滤液，取续滤液5mL，置200mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
　　
　　1.3测定法
　　
　　精密量取对照品溶液与供试品溶液各2mL，分别置于10mL量瓶中，各加2%苯酚溶液0.5mL，浓硫酸5mL，摇匀，置水浴中加热30分钟，然后置冰水浴中冷却15分钟，摇匀，照分紫外光光度法，在490nm波长处分别测定吸收度，按下列公式计算，即得。
　　
　　cx=(Ax/AR)cR
　　
　　式中cx为供试品溶液的浓度；
　　
　　Ax为供试品溶液的吸光度；
　　
　　cR为对照品溶液的浓度；
　　
　　AR为对照品溶液的吸光度。
　　
　　按上述方法测得黄芪多糖（无锡正大公司生产，批号080928）含量如下：

	称量	吸光度A	含量
对照品	0.0699g	0.666
供试品1	1.0034g	0.681	71.2%

　　2黄芪提取物中加葡萄糖掺假的黄芪多糖鉴别和含量测定
　　
　　2.1对照品溶液制备
　　
　　取黄芪多糖5g（无锡正大畜禽有限公司生产含量70％左右）作为对照品。加水20毫升稀释、加纯酒精80毫升搅匀静置沉淀。
　　
　　2.2供试品溶液制备
　　
　　取需检测的黄芪多糖样品5g，与上述同法制备。
　　
　　2.3鉴别与含量测定
　　
　　2.3.1鉴别1观察对照品上清液为棕红色，底部有黄芪多糖沉淀。供试品上清液明显变淡，底部黄芪多糖沉淀物明显少于对照品。因为在80％的酒精中黄芪多糖不溶解而葡萄糖完全溶解。
　　
　　2.3.2鉴别2与含量估测倒去上清液将沉淀物烘干称重，对照品的重量大于供试品的重量，即可判断供试品中加入部分葡萄糖掺假。用供试品的重量除以对照品的重量乘70%就可以计算出供试品中黄芪多糖的大概含量。
　　
　　按上述方法2.3.2方法测得黄芪多糖（无锡正大公司生产，批号080928）与50%黄芪多糖加50%葡萄糖混合物沉淀物重量如下：
　　
　　

	黄芪多糖	混合物	比例	混合物中黄芪多糖含量
沉淀物重	2.20g	1.25g	56.8%	56.8%×0.7=39.7%

　　注：混合物中黄芪多糖含量的理论值为2.5g×70%/5g=35%。本法仅用于鉴别或粗略估算。
　　
　　2.3.3鉴别3与含量测定取上述供试品溶液，滤过，取滤液测葡萄糖含量。可根据旋光光度法依法测定旋光度（兽药典附录47），与1.0426相乘，即得出供试品中掺入的葡萄糖量。
　　
　　按上述方法2.3.3方法测得黄芪多糖（无锡正大公司生产，批号080928）与50%黄芪多糖加50%葡萄糖混合物上清液中葡萄糖的含量如下：
　　
　　

	旋光度a	混合物中掺入葡萄糖
混合物	2.449	2.5533

------《赛尔饲料工业》

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