É 型鸭肝炎病毒变异株的鉴定

peteryuanfeng

1 周, 在四免1 周后, 采血分离血清, 置-   20℃保存。按
此程序制备两个批次血清, 一次为兔抗C80 和E28 的
血清, 二次为兔抗C80 和E63 的血清。阴性血清取自
未免疫健康兔。
1.  4　人工致病试验　取1 日龄鸭, 经腿部肌肉注射
DHV  强毒, 0.  5 m lö只, 观察7 天。用1 日龄雏鸭盲传
1 次, 取有典型DHV  病变的肝脏制成匀浆并加抗生
素, 用7 日龄鸭返强 2 代。以此比较E3 和C1 的致
病性。
1.  5　PCR 和R T 2PCR 　检测E8, 以D PV M LV  为对
照, 用PCR  扩增鸭瘟病毒的U L 6 基因, 核酸提取、引
物设计、PCR 反应条件和程序均参照文献[ 6 ]。用R T 2
PCR 扩增禽流感病毒的N P 基因, 委托农业部兽医诊
断中心检测。
1.  6　免疫电镜　取E63 的尿囊液, 10 000 röm in 离
心60 m in, 留上清, 45 000 röm in 离心3 h, 用少量T ris
盐酸(0.  01 m o l,  pH  7.  4) 悬浮沉淀, 超声波裂解, 12
000 röm in 离心30 m in, 取上清, 1 份上清液中加4 份
兔抗E63 血清, 4℃过夜, 12 000  röm in 离心30 m in,
取沉淀用双蒸水悬浮, 经醋酸铀负染, 透射电镜观察。
1.  7　交叉中和试验　用固定血清2稀释病毒的方法
在鸡胚上进行。抗血清置60℃ 30 m in 后, 用生理盐水
稀释1∶5。将病毒用灭菌生理盐水进行10 倍系列稀
释, 每个稀释度病毒液分别与等量阴阳性血清混合,
37℃反应1 h, 每个稀释度接种5 枚鸡胚, 0.  2 m lö胚,
观察7 天, 记录鸡胚死亡数, 按常规方法计算抗体中
和效价以及毒株间的相关系数[ 7,  8 ]。试验分两次, 分
别用E28 和E63 与C80 进行比较。
2　结果
2.  1　人工致病试验　在初代接种中, 待检病毒E3 和
É 型强毒C1 均未致死1 日龄雏鸭, 但盲传一代后, 待
检毒株的死亡率达60% , DHV  É 型强毒的死亡率为
10% , 此后用7 日龄鸭传代时, 待检毒株的致死率均
为100% , 而DHV  É 型强毒仅有10%～ 40% 的死亡率
(表1)。
接种后24 h 内, 雏鸭表现精神沉郁, 死亡多发生
于接种后24～ 96 h, 接种144 h 后, 存活鸭常恢复正
常。濒死鸭侧卧于地, 头颈摇晃, 双腿反复蹬踢, 表现
出典型的DHV  症状, 部分死亡鸭呈角弓反张。死亡鸭
的肝脏稍肿大, 有多少不等的出血点, 存活鸭未见明
显病变。