猪流感实验室诊断方法汇总

bluewing2003

实验室诊断
目前国内外的实验室诊断方法有以下几种。

1.）病原分离。

病原分离是最准确的诊断方法，但是缺点是确诊时间长。由于猪流感病毒对外界的抵抗力很弱，因此对具有呼吸道症状猪进行病毒采集，并迅速进行分离，是病毒分离的关键。从活体内分离病毒可采用鼻粘膜拭子法。采集的拭子放在适当的运输培养基如生理盐水、PBS、MEM中尽快送往实验室。病死猪则采集病变的上呼吸道和肺组织。样品经常规无菌处理后接种鸡胚或敏感细胞, 于33～35 ℃孵育48～72h后,收集尿囊液或细胞培养液进行HA试验以证明是否有流感病毒的存在。若初代分离物无HA活性,则再盲传两代。用HI试验和神经氨基酸酶抑制NI试验可确定分离到的流感病毒的血凝素及神经氨基酸酶亚型。

2.）血清学诊断。

A：HA和HI实验一般采取患猪急性期和恢复期（相隔10~21天）的双份血清样品，如恢复期抗体效价较急性期增加4倍以上，即表明感染了猪流感病毒。

B.酶联免疫吸附试验：是当前应用最广泛的一钟免疫测定方法。该方法具有使用方便，敏感性好，特异性高，可检测抗原和抗体等特点。明尼苏达州兽医诊断实验室（MDVL）发现，猪免疫后7天即能检测出抗体，而HI试验需7-10天，并且ELISA结果可直接由数据显示出来，而HI却要记录，因此，他们更倾向于ELISA

C：荧光抗体试验：将已与荧光剂相结合的猪流感抗体滴加在肺组织的冰冻片上，然后在显微镜下对切片进行观察，鉴别被病毒感染的细胞。本试验可以快速的获得结果，并且具有操作简单，费用较低等优点，在美国已广泛使用。

D：免疫组织化学试验：此试验与荧光抗体试验很相似，是将抗体滴加到甲醛上，然后在显微镜下观察。本试验和荧光抗体的灵敏性相当，不但可以检测新鲜的病料，而且可以检测尸检时固定良好且送检过程中没有丧失组织完整性的病料。

3.）分子生物学诊断

快速诊断RT-PCR：美国Chio YK等建立了H1N1、H1N2、H3N2亚型SIV的RT-PCR方法。通过琼脂糖凝胶电泳，RT-PCR对阳性样品能产生唯一的阳性带，而12种猪常见的呼吸道疾病均没有产生扩增反应。本试验快速、可靠，是猪流感诊断的有效工具。
4.) 动物试验： 采取患猪的鼻液、气管、细支气管分泌物或死亡猪只的肺，按常规处理后，每只小白鼠或家兔颅内接种0.1~0.5毫升，或取0.5~2毫升腹腔或静脉注射。颅内接种的动物在24~72小时后出现强直性或阵发性惊厥、痉挛或者死亡。腹腔或静脉注射的动物，一般于12~48后进行剖解，可见肝坏死，肺肿大，