六种中草药对几种常见细菌的体外抑菌试验

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六种中草药对几种常见细菌的体外抑菌试验 叶衬弟指导教师：张继东 （湛江海洋大学动物科学系广东湛江 524088）

摘要：本试验用琼脂扩散法和试管稀释法测定了大飞扬草(Euphorbia hirta L.)、鸡骨草(Abrus fruticulosus Wall.)、鸡屎藤(Paederia scandens Merr.) 、鬼针草(Bidens bipinnata L.)、醡浆草(Oxalis corniculata L.)和黄连(Coptis chinensis Franch)等六种中草药对沙门氏菌、大肠杆菌K88、大肠杆菌26、大肠杆菌40四种病原菌的体外抑菌作用。试验表明，四种病原菌对醡浆草均呈高度敏感,MIC为10U/ml;四种细菌对黄连均呈中度敏感，其中沙门氏菌的MIC为2.5U/ml，其余三种细菌的MIC均为5U/ml。沙门氏菌对鸡骨草呈中度敏感,而其MIC大于10U/ml.其余三种中草药未见抑菌作用。 关键词：中草药体外抑菌试验最小抑菌浓度 畜禽疾病的治疗是备受关注的问题，广大兽医工作者经过多年的研究实践，已取得了一些令人可喜的成果，但由于抗生素等药物的滥用，致使病原的抗药性增强，造成高药物残留等问题，这一直是困扰兽医工作者的难题。而中草药为天然药物，毒性低，副作用小，可以避免像使用西药一样带来的某些不足【1】。筛选对病原微生物敏感，抑菌强度大，特异性高，对环境稳定的中草药来防治畜禽疾病，是发展养殖业的一个重要课题。本试验旨在筛选出当地对常见病原菌敏感的中草药，为临床防治畜禽疾病，降低生产成本，提高生产效益提供资料。 1．试验材料 1．1 药物 大飞扬草、鸡骨草、鸡屎藤、鬼针草、醡浆草5种新鲜草药各500克，黄连（买自某中药店）10克。 1．2 菌种 沙门氏菌、大肠杆菌1、大肠杆菌2、大肠杆菌K88（由微生物实验室提供）。 1．3 培养基 (1) 营养琼脂按常规方法制备营养琼脂平板（牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1000ml）。 (2) 营养肉汤按常规方法制备（牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml）。 1．4 试验设备 (1)主要仪器 人工台式离心机、高压蒸汽灭菌器、冰箱、培养箱、无菌工作台。 (2) 其他设备 研钵、天平、电炉、平皿、试管、三角烧瓶、烧杯、酒精灯、移液管、胶头滴管、接种环、游标卡尺。 2．试验方法 2．1 菌种的培养 将菌种接种于营养肉汤中，37℃培养18h，备用。 2．2 药液的制备 取待试新鲜草药各适量，分别用研钵研磨成糊状，离心沉淀，各取上清液5ml，灭菌备用。黄连10克置于烧杯中，加5～7倍量的水浸泡1小时，煮沸30min，过滤，浓缩至每毫升含1g生药，灭菌备用。 2．3 药物敏感性测定 本试验采用琼脂扩散法和试管稀释法用相同的中草药对相同的菌种进行抑菌试验，比较各种中草药的抑菌效果。 (1) 琼脂扩散法 用灭菌棉签蘸取供试菌液，均匀涂布于营养琼脂平板上，然后用直径6mm的琼脂打孔器均匀打孔，每板6孔，去除孔内琼脂并适当封闭孔底。将供试药液加于孔中，以满而不溢为宜并作好标记。置4℃冰箱中作用1小时后取出并置于37℃恒温箱中培养24小时，观察结果。判定标准：抑菌圈直径小于10mm为耐药，10～15mm为中度敏感，大于15mm为高度敏感。 (2) 试管稀释法 取无菌试管10支，第1管加入1.8ml营养肉汤，2～10管加入1ml营养肉汤。以无菌操作吸取已制备好的供试药液0.2ml加入第一管中，混匀后吸取1ml加入第2管中，依次倍比稀释至第9管弃去1ml，第10管不加药液为对照管（详见表1）。 表1试管稀释法操作方法 试管号12345678910 培养基（ml）1.81.01.01.01.01.01.01.01.01.0 药液（ml）0.21.01.01.01.01.01.01.01.01.0 （弃去） 试验菌液（ml）0.050.050.050.050.050.050.050.050.050.05 药液浓度（U/ml）10 52.51.250.630.310.160.080.040 37℃培养18～20h后观察结果，能够完全抑制细菌生长的最小药物浓度为最小抑菌浓度（MIC）。 3．试验结果 （1）由琼脂扩散法实验结果可知，四种病原菌对醡浆草均呈高度敏感,对黄连均呈中度敏感，沙门氏菌对鸡骨草呈中度敏感,其余三种中草药未见抑菌作用（详见表2）。 表2中草药对细菌的抑菌情况 沙门氏菌 大肠杆菌1 大肠杆菌2 大肠杆菌K88 大飞扬草 8 0 0 0 鸡骨草 10 0 8 8 鸡屎藤 8 0 0 0 鬼针草 8 0 0 0 醡浆草 17 15 15 16 黄连 13 12 12 12 （2）在试管稀释实验中测得醡浆草对几种细菌的MIC均为10U/ml; 黄连对沙门氏菌的MIC为2.5U/ml，对其余三种细菌的MIC均为5U/ml。鸡骨草对沙门氏菌的抗菌作用不明显，MIC大于10U/ml（详见表3）。 表3中草药的最小抑菌浓度 沙门氏菌 大肠杆菌26 大肠杆菌40 大肠杆菌K88 大飞扬草 － － － － 鸡骨草 >10 － － － 鸡屎藤 － － － － 鬼针草 － － － － 醡浆草 10 10 10 10 黄连 2．5 5 5 5 4．讨论与小结 4.1本试验用琼脂扩散法对所试中草药的抑菌作用作了定性检定，然后用试管稀释法对其药理活性进行定量分析，六种中草药用琼脂扩散法和试管稀释法得到的结果相符。以醡浆草抑菌作用最强，黄连次之，其他四味中草药效果较差或未见抑菌作用。为临床防治所试敏感病原菌感染提供了一定的试验依据。 4.2由试验结果可知，醡浆草对四种细菌的抑菌效果均较明显，但有报道，醡浆草对金色葡萄球菌有抗菌作用，对大肠杆菌则无效，与本试验结果不相不同。 4.3本试验琼脂扩散法中沙门氏菌对鸡骨草为中度敏感，在试管稀释法中测得的最小抑菌浓度大于10u/ml，表明其对沙门氏菌的抑菌效果较差。据报道，鸡骨草能降低葡萄球菌毒素引起的炎症反应，但对其他细菌无抗菌作用；鬼针草在体外对革兰氏阳性细菌由抑菌作用，但它对沙门氏菌也不表现抑菌效果。本试验结果证明，鸡屎藤、大飞扬草、鬼针草三种中草药对所试4种细菌均无明显抑菌作用，并从一个侧面验证了有人报道，鬼针草单味无明显作用，与海州常山混合使用才有作用的结果。