动物性饲料体外蛋白质消化率测定的关键控制点

gengqing3329

  以下是本人在网上找到的一篇文章，可是这篇文章中直说样品放在摇床上，可是摇得速度或震荡的速度是多少？我以前也在化验室室做过这方面的很多试验，可是不同的速度会有不同的结果！请问速度到底是多呢？

动物性饲料体外蛋白质消化率测定的关键控制点


随着我国养殖业和饲料工业的迅速发展，常规蛋白质饲料资源如鱼粉、豆粕等越来越短缺，饲料原料的质量很不稳定，掺假、使杂现象严重。副产品如羽毛粉、血球粉等由于采用的加工工艺不同，尽管蛋白质含量很高（70%~80%，甚至高达90％），但其消化率变动范围很大。我们实验室近3年共对近百个鱼粉、肉粉、肉骨粉和羽毛粉样品进行了体外消化率的测定，鱼粉和肉骨粉的结果范围为63.2%～96.8％，羽毛粉为20.2%～78.3％。尽管优质纯鱼粉的消化率达90％以上，但掺入羽毛粉、血粉等后，鱼粉从常规分析蛋白质含量够，但使其消化率大大下降，有的仅60％左右，因此，评定动物性饲料的营养价值，除了常规分析指标粗蛋白、钙和磷等，其消化率是一个很重要的评价指标。
    通过动物试验评定饲料营养价值费时费力，成本较高。目前我国已经颁布的GB/T17811-1999《动物蛋白质饲料消化率的测定 胃蛋白酶法》，是相对于动物性试验的简便、快速评价方法。但在使用这一方法时，由于对方法的理解和掌握不够，导致不同实验室间的测定结果差异很大。现将测定过程中的关键控制点介绍如下。
1 方法的适用范围
    该方法仅适合于动物性蛋白质饲料，如鱼粉、肉骨粉、羽毛粉、酵母粉、血粉等体外消化率测定。该方法不适合用于植物蛋白质饲料原料（如豆粕、菜籽粕、棉籽粕及其它杂粕）或配合饲料，因为它们中存在的复杂碳水化合物如纤维性物质及淀粉等会干扰胃蛋白酶对蛋白质的消化。
2 样品选取和制备
    选取有代表性的样品，粉碎并全部过20目筛（孔径0.9 mm）。注意事项：①不能过细，也不能过粗。因为样品的粉碎粒度直接影响消化率的高低，粉碎过细，单位质量样品的接触面积增加，会导致消化率结果偏高；反之，则会导致结果偏低。②不能只取筛下物去做分析测定，因为筛下物的样品不能完全代表待检样品。因此要让样品全部通过20目筛，混匀后再进行测定。
3 试剂和溶液配制
3.1 2g/l胃蛋白酶溶液的配制
    ①移取6.1ml浓盐酸，加蒸馏水稀释至1 000ml；②将上述稀盐酸加热升温至42～45℃，取下，然后加入2g活性为1：10 000生化级胃蛋白酶，轻轻地搅动，使其溶解。
3.2 注意事项
    ①所用的胃蛋白酶必须为生化级，如果有条件的，最好对其活性进行实测。如果其活性为1：3 000或其它规格，应按照活性比例，相应增加或减少酶的用量，使胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的活性为20IU/ml。因为胃蛋白酶溶液中酶活性的高低直接影响消化率的高低。如果与标准偏离，测定结果将无可比性，失去参考价值。②溶液一定要现用现配，避免配制时过热，注意勿在加热板或电炉上直接加热胃蛋白酶溶液，否则会使沉于烧杯底部的酶直接局部过热而失活。
4 测定步骤及注意事项
4.1 测定步骤
    称取试样1g（精确至0.000 1ｇ）于300ml具塞三角瓶中，准确加入42～45℃的2g/l胃蛋白酶溶液150ml，加塞，置于摇床，45℃条件下消化16h。消化后残渣用滤纸过滤，并用蒸馏水洗净滤纸上的未消化残渣，然后将未消化残渣连同滤纸一起转入凯氏消化管，按照凯氏定氮方法测定粗蛋白质含量。同时测定样品中粗蛋白。根据样品中粗蛋白含量与未消化残渣中粗蛋白质含量之差与样品中粗蛋白含量的比值计算得出体外消化率的结果。
4.2 注意事项
    ①如果样品的脂肪含量达1%~10％，最好脱脂；含脂肪大于10％，则必须脱脂，否则脂肪会影响测定结果。另外，脱脂后的样品需干燥后再称样测定。②胃蛋白酶的活性高低与温度有密切关系，42～45℃条件下活性较高。如果温度过高会使酶失去活性；反之，会使酶的活性降低。因此，消化用的摇床或烘箱的温度一定要控制准确，最好经过温度校准。③在pH值和温度一定的条件下，消化时间的长短是影响消化率的一个关键因素。消化时间越长，消化率越高；反之，消化率越低。为了使所获得的数据结果具有良好的可比性，要严格控制消化时间。④如果基层实验室没有恒温平转摇床，也可在45℃恒温烘箱中进行消化，但消化的最初4h，每0.5h摇动1次；4～8h，每1h摇1次。

    我们选取了2个鱼粉和1个羽毛粉样品，对在烘箱和摇床上的测定进行了比较试验，结果见表1。从表1结果可以看出，同一样品在摇床和烘箱中进行消化测定结果无显著差异，烘箱中测定结果略低于恒温平转摇床上的测定结果。
5 结果及判断
    如果严格掌握好以上实验条件，就可以获得准确且具有良好重现性的结果见表2。
一般来讲，鱼粉的消化率应不低于85％，优质鱼粉应该在90％以上，而饲用羽毛粉的消化率应不低于75％。

参考文献
1 GB/T17811-1999 动物蛋白质饲料消化率的测定.胃蛋白酶法
2 Journal of Association of Official Analytist Chemists, 1971, 54:669

trssjc

不错的资料，我们正想开展这方面的检测。