一起育肥猪食物中毒的病例分析

dongbaihua2000

2005年11月14日中午12:31，亭湖区动物疫病监测中心接到110来电，请求帮助查看一养殖户生猪突然死亡的原因。工作人员随即赶到现场。养殖户施某家存栏商品猪57头，当天早晨猪群完全正常，喂过食后户主去田里干活，中午回来发现有13头猪死亡，还有几头精神沉郁。施某怀疑有人投毒，遂报警。经现场症状观察、病理解剖、病史调查和生化实验，诊断结果为育肥猪亚硝酸盐及亚硝胺急性中毒症。
1、发病情况
该养殖户存栏57头育肥猪，体重40-80千克，分8个圈饲养，发病前相当健康。体重最大的一圈死亡率最高，8头死了7头，还有一头目光呆滞、精神沉郁。最小的一圈没有死亡，精神状况基本正常。整个发病期共计死亡18头猪。
2、临床症状
最先死亡的13头猪横七竖八地倒在圈里，可视黏膜发绀（13/13），皮下淤血（4/13），发病猪精神沉郁、呼吸急促、心跳快速、脉搏浅弱、多数猪体温偏低，为36.5-37℃。发病猪耳朵尾根厥冷，时有阵发性抽搐。
3、病理解剖
血液呈酱油色，凝固不良（13/13），肝胀肿大出血，病理切片肝小叶出血性坏死（6/13），肺出血（6/13），胸腔、腹腔有出血性渗出液（8/13），胃大弯和幽门处黏膜出血（8/13），肠道膨胀鼓气（9/13）。其它未见明显变化。
4、询问病史
问诊该养殖户，猪群一直很正常，从未发病。所喂的饲料都是从菜场拖回的废弃的青菜、芹菜、菠菜、韭菜等杂物和鱼的内脏。饲喂前将这些废弃物剁碎、混匀，加热。仓库里堆有没有饲喂的菜叶，许多已经腐烂。
5、生化实验
取解剖猪胃内容物液体两滴于滤纸上，加10%联苯胺三滴，再加10%醋酸两滴。滤纸立即呈现棕色。
6、结果分析
综合以上几点，可以认为这是一起育肥猪急性亚硝酸盐及亚硝胺中毒并引起死亡的病例。究其原因，可以从饲料中的化学反应进行分析。
6.1蔬菜中硝酸盐的还原反应
正常情况下，各类新鲜蔬菜中都不同程度地含有硝酸盐（见表1）和亚硝酸盐。植物体内亚硝酸酶含量比硝酸还原酶的含量高得多，所以新鲜蔬菜中亚硝酸盐的含量仅占硝酸盐含量的2-50/00。一旦蔬菜进入贮藏和运输环节，细胞会发生碎裂，释放出硝酸还原酶，使硝酸盐还原为亚硝酸盐。另外，蔬菜在贮藏过程中，某些大肠杆菌、链球菌、产气荚膜杆菌、摩根变形杆菌等在适当的温度、水分、PH值和渗透压等条件下可促使硝酸盐还原为亚硝酸盐。如新鲜蔬菜中亚硝酸根的含量仅4.8ppm，贮存3天后，可升至17.0ppm，如将煮沸的菠菜置于30℃24小时后，亚硝酸根的含量可猛增至393ppm。
表1 新鲜蔬菜中-NO3-含量
蔬菜        -NO3-含量（ppm）
青菜        3560
芹菜        3620
菠菜、莴苣        3000
韭菜        3640
6.2鱼内脏中化学物质的反应
鱼内脏中含有大量的动物性蛋白和不饱和脂肪酸。蛋白质在一定条件下分解为氨基酸再脱羧基成为相应的胺类物质，其中仲胺的含量最高。在亚硝酸盐含量足够时，仲胺极易反应生成亚硝胺。
6.2.1在酸性条件下亚硝酸盐转化为有活性的亚硝化剂。
NaNO2+HCl⇌HNO2+NaCl   2HNO2 ⇌ N2O3 + H2O
HNO2 +CNS- +H+ ⇌ON-CNS +H2O  
     HNO2 +HX ⇌ ON-X +H2O
2HNO2 ⇌ （H2NO2）++ NO2-
6.2.2这些具有活性的亚硝化剂与仲胺反应得到亚硝胺。
(CH3)2NH + N2O3 ⇌ (CH3)2N-N=O + HNO2
R1R2CONH + （H2NO2）+ ⇌ R1R2CON-N=O + H2O + H+
育肥猪胃内的酸性环境恰好促进了以上化学反应的发生。
6.3毒理作用
6.3.1亚硝酸盐进入血液后, 亚硝酸根可与血红蛋白相互作用，使正常的血红蛋白氧化成高铁血红蛋白。正常机体内，由于红细胞内具有一系列酶促和非酶促的高铁血红蛋白还原系统，故正常红细胞内高铁血红蛋白只占血红蛋白总量的1%左右。当机体摄入大量亚硝酸盐时，红细胞形成高铁血红蛋白的速度超过还原的速度。高铁血红蛋白大量增加，引起机体组织缺氧，导致家畜中毒。以猪为例，当猪红细胞内高铁血红蛋白占血红蛋白总量的20%时即表现中毒症状，占76%以上时即导致死亡。
6.3.2鱼的内脏反应得到的亚硝胺一般很少表现出急性毒性，但亚硝酸盐含量高时可以引起严重的肝、肺、肾等实质器官的组织损伤。
7、小结
这是一起由饲料亚硝酸盐和亚硝胺含量过高引发的育肥猪高铁血红蛋白中毒并引起死亡的病例，并非他人投毒。猪群中大猪采食量高、发病严重、死亡率高，小猪采食量小，发病较轻。养殖户施某对自己因贪图便宜采用废弃蔬菜和鱼内脏作为饲料喂猪感到悔恨不已。在110民警和动物防疫人员的监督和指导下，施某一方面迅速采用1%亚甲兰静脉注射治疗发病猪，另一方面催家人将已死亡的育肥猪做无害化处理。

dongbaihua2000

1．病原学
1．1 病原分类
附红细胞体是一类无细胞壁、嗜血液寄生的多形态微生物[1]。1928年Schilling等首次在啮齿动物血液中发现并建立了附红细胞体属[4]。以后相继在猪、牛、绵羊、山羊、马、兔、犬、猫、猴、骆驼、羊驼、狐类、驴、鹿、角马、骆马等哺乳动物和鸟类及人体中证实有附红细胞体的感染。迄今为止，已发现并命名的附红细胞体有数十种，主要有球状附红细胞体（E.coccoides）（鼠）、异形附红细胞体（E.dispar） (鼠)、猪附红细胞体（E.suis）（猪）、小附红细胞体（E.parvum）（猪）、温氏附红细胞体（E.wenyoni）(牛)、E.teganodes(牛)、E.tumoii(牛)、绵羊附红细胞体（E.ovis）(绵羊)、山羊附红细胞体（E.herci）（山羊）、兔附红细胞体（E.lepns）(兔)、犬附红细胞体（E.canis）(犬)、E.perekropovi（犬）、猫附红细胞体(E.filis)、微小附红细胞体（E.minutum）(猫)、E.mariboi（狐）、鸡附红细胞体（E.galli）(鸡)、E.noguchii(人)和人附红细胞体(E.humanus)(人)等[1，4，5]。由于附红细胞体多数是根据宿主来命名的，而有些附红细胞体并不具有严格的宿主特异性，例如绵羊附红细胞体也可感染山羊[6]，因此，有些种类可能是同物异名。现已证实，猪的小附红细胞体是猪附红细胞体的前体或未成熟阶段，两者是同一个种。
目前，国际上将附红细胞体列入立克次氏体目（Rickettisiaies）、无形体科（Anoplasmataceae）、附红细胞体属（Eyperythrozoon）[7]。但Rikihisa（1997）[8]通过对猪附红细胞体的基因序列（16SrRNA）的分析，发现其基因序列与霉形体科（Mycoplasmataceae）的同源性较高。随后Neimark(2001)[6]对温氏附红细胞体、猪附红细胞体、猫血巴通氏体（Haemobartonella felis）和鼠血巴通氏体（H.muris）的基因序列分析也获得了相同的结果，发现它们的基因序列与柔膜体纲（Mocullicute）、霉形体属（Mycoplasma）较接近，在霉形体属的肺炎型组内形成一个新的分支，认为宜将这4种嗜血性细菌归属霉型体属，同时分别重新命名为温氏霉形体（Condidatus Mycoplasma wenyonil）、猪嗜血霉形体（Candidatus Mycoplasma haemosuis）、猫嗜血霉形体（Condidatus Mycoplasma haemofelis）和鼠嗜血霉形体（Candidatus Mycoplasma haemomuris）。最近Messick(2002) [9]用同样的方法，将在袋鼠、羊驼和犬血液内发现的附红细胞体样寄生物命名为袋鼠嗜血霉形体（Condidatus Mycplasma haemsdidelphidis sp.nov.）、羊驼嗜血霉形体（Condidatus Mycoplasma haemolamae sp. nov）和犬嗜血霉形体（Mycoplasma haemocanis comb nov.）。
1．2 病原形态
用光镜和电镜对附红细胞体进行显微和超微结构观察，发现附红细胞体是一种典型的原核生物，是多形态生物体[4]。
1）电镜下观察[10-15]，附红细胞体无细胞壁，仅有单层界膜，无明显的细胞器和细胞核。多数为球形小体，直径在0.3～1.5μm，偶见杆状附红细胞体，可单个或多个呈小团状附着在红细胞表面，其中较小的幼稚附红细胞体与红细胞之间形成约30nm宽的电子透明区，而较大的成熟附红细胞体则可使附着处的红细胞膜凹陷，甚至形成空洞。有些大型的附红细胞体可伸出纤丝，嵌在细胞膜上。
2）光镜下观察[4，11。12，14，16]，鲜血压滴镜检可见附红细胞体形态多呈环形、圆形、卵圆形、顿点形、杆状等，多数聚集在红细胞表面，少则3～5个，多则达15～20个，也可游离于血浆中作上下左右扭转翻滚等运动，一旦附在细胞表面运动即停止。被感染的细胞常失去正常的球状立体形，边缘不整齐，呈锯齿状、星芒状、不规则多边形状等。环状虫体大小为0.3～0.4μm，最大可达1.5μm，杆状虫体大小为（0.3～0.5）μm×(0 .2～0.3) μm.。血涂片染色镜检，可见附红细胞体形态也呈多形性，但以圆形为主，多数以单个或多个附着在细胞表面，甚至布满整个红细胞表面。瑞氏染色附红细胞体染成浅蓝色，姬姆萨染色体呈紫红色，革兰氏染色呈阴性，苯胺类色素易着色。
1．3 生物学特征
附红细胞体的发育过程及传播途径还不清楚，但可以肯定附红细胞体主要在宿主红细胞上以二分裂法进行繁殖[1]。现已证实猪虱、鳞虱、伊蚊、库蚁、吸血蝇等可为家畜附红细胞体病的传播媒介[17-19]，认为节肢动物是终未宿主，猪是中间宿主，附红细胞体在猪血液中进行裂殖增殖[20]。刘兴发等[21]（1997）在对附红细胞体人畜感染及传播途径的调查后认为，猪、奶牛和人附红细胞体感染可通过垂直途径传播，而鸡的附红细胞体感染不能经卵垂直传播，认为垂直传播和血源传播是人感染附红细胞体的主要途径。附红细胞体在体外不能纯培养，但可在体外进行增殖培养。律祥君等[22]报道感染猪全血与健康猪全血等量混合后经细胞培养液稀释，在37℃厌氧培养96h时猪附红细胞体的增殖效果最好，厌氧条件下加细胞培养液和感染猪全血，未见附红细胞体有明显增殖。Nonakal 等 [23] 报道猪附红细胞体在厌氧或5%CO2条件下，可在含10%小牛血清的rEM培养液中生长，rEM中加入肌苷可使细胞保持完整性，并促使附红细胞体吸附于红细胞。在体外，附红细胞体对低温抵抗力较强，在4℃的血液中可存活1个月，不受红细胞溶解的影响，-80℃时可存活80d，感染血液中加入二甲基亚砜（DMSO）和10%甘油或10%马血清，可在液氮或-70℃长期保存。但附红细胞体对干燥和化学消毒药品抵抗力较弱 [1] 。
2．诊断学
可根据流行病学特征、临床症状、血常规检查及病理剖检等做出初步诊断，确诊需查见病原、特异性抗体或DNA片段等。
2．1 光镜镜检
是诊断本病最基本的方法。根据临床症状需要可选用压滴法、血片染色法等。阳性判断标准为，在1000倍油镜下观察20个视野，发现附红细胞体则判为阳性，其中将附有虫体的红细胞占全部红细胞的10%以下判为“＋”；10%～~50%判为“＋＋”；50%～75%判为“＋＋＋”；75%以上判为“＋＋＋＋”；20个视野均未见附红细胞体判为阴性 [4，16，21] 。
2．2 动物试验
用可凝动物或人的血液，经腹腔、肌肉或静脉接种小鼠、兔和鸡等实验动物，然后观察实验动物的病状，并采血检查附红细胞体。或将可凝动物和脾脏摘除，然后观察其症状，并从血液中检查病原[4，24]。本法有一定的辅助诊断意义，常用于附红细胞体病的实验性研究。
2．3  免疫学诊断
1）补体结合试验（CFT）  Splitter首先用于诊断猪附红细胞体病，急性病型效果好。临床发病后第3天，患畜血清即显阳性反应，2-3周后渐转为阴性，但慢性带菌者显阴性反应。Daddow[25]（1997）用感染有绵羊附红细胞体的阳性血液反复冻融，离心沉淀后超声波裂解制作抗原，建立了检测绵羊附红细胞体抗体的CFT试验，该法可用于羊群的检测，但不适用于个体的诊断。Norris[26]（1987）也建立了检测绵羊附红细胞体抗体的CFT试验。
2）间接血凝试验（IHA）  Smith（1975）[27]首先建立该法用于检测猪附红细胞体的抗体，IHA滴度1：40为阳性，灵敏度较高，能检出CFT反应转阴的耐过猪。Baljer[28]（1989）应用该法对实验性感染猪附红细胞体后猪血清中抗体的消长规律进行了研究，结果显示抗体在隐性感染时基本不产生，急性感染时升高，持续2个月后降到最低，然后随着临床症状的重现而再次上升。
3）简接荧光抗体法（IFA）  该法最早用于诊断牛附红细胞体病，抗体于接种后第4天出现，随着寄生率的上升，在第28天达到高峰，较血液涂片法敏感 [29] 。也可用于绵羊附红细胞体的检测 [30] 。
4）酶联免疫吸附试验（ELISA）  1996年Lang等用去掉红细胞的绵羊附红细胞体抗原对羊进行ELISA检测，认为此法比IHA的敏感性高8倍。用此法检测猪，敏感性高于IHA法，且特异性好，不与猪和牛的其他疾病发生交叉反应，但此法不适于小猪和公猪的诊断，也不适于急性期的诊断[31，32]。用此法也可检测牛的温氏附红细胞体感染[33]。
2．4 分子生物学诊断
应用DNA探针技术和PCR技术等分子生物学方法诊断或检测附红细胞体病的报道始于上世纪90年代。1991年Oberst用噬菌体gtll构建了猪附红细胞体的DNA文库，并筛选出KSU-2克隆作为诊断用探针，能与从阳性猪血提取的DNA发生杂交反应，但不与从阴性猪血、猫血通氏体阳性猫血、犬血巴通氏体阳性犬血和牛边缘边虫（Anaplasma marginale）阳性牛血中提取的DNA发生杂交反应，随后Oberst又利用PCR-DNA杂交技术分别检测了实验感染和自然暴发的猪附红细胞体病猪血液中的病原体[34]。Gwaltney[35]（1993）用组织原位染交和电镜相结合的方法检测了血液样品中的附红细胞体，建立了检测猪附红细胞体的PCR方法，其最低检测基因组量为450pg，且优于IHA。Messick[36]（1999）首次用针对猪附红细胞体16SrRNA基因的3对特异性引物建立了PCR方法，其最低检测量为57个猪红细胞体，且特异性强。Vandervoort(2001)[37] 建立了检测牛温氏附红细胞体的RCR方法，其敏感性较血液涂片法高，甚至可检测出血液涂片为阴性的病例。
3、结语
附红细胞体的首次发现至今已有近80年，但过去由于其对人和动物感染的普遍性及临床发病的不显性，所以没有引起重视。近年来随着人体病例的增多及畜群中普遍多发造成重大的经济损失，才逐渐引起了医学界和兽医界的重视。但目前国内大部分研究仅局限于该病的流行病学调查、诊断和治疗等，有关病原的分类、宿主特异性与交叉感染性、发育过程、体外培养、分子生物学特性等研究尚缺乏或不够深入，生产实践中也无行之有效的控制方法。基于该病的隐性感染很高，潜在的危害性很大，且具有人畜共患的特性，因此应进行深入细致的研究。

sdjgq

文章很好.只是你的区域性不对呀.应该发到猪区里.或是疾病防治里.