两种检测方法检测猪伪狂犬病活疫苗免疫猪抗体试验比较

nety 2007-7-1 18:34

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　　伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的猪和其它家畜及野生动物的急性、致死性传染病。临床上以发热、奇痒(猪除外)、脑脊髓炎为主要症状。猪伪狂犬病疫苗免疫及抗体检测作为防治猪伪狂犬病的关键技术，在生产中得到了广泛应用。本试验采用病毒中和试验和乳胶凝集试验两种方法检测伪狂犬病活疫苗免疫猪，免疫10天、20天后的血清抗体水平。
　　一、材料与方法
　　1.伪狂犬病活疫苗由本厂生产，批号为200301001、200304002
　　2.试验猪由本厂健康动物室自繁自养的检验用猪，体重35-50Kg，经采用乳胶凝集试验(LAT)检测伪狂犬病抗体阴性。
　　3.免疫方法将上述我厂生产的两批伪狂犬病活疫苗，每批接种伪狂犬病阴性的健康敏感猪4头。每头肌肉注射lml(1头份)，分别于免疫10天后、20天后采血分离血清。
　　4.血清稀释先将待检血清56℃水浴灭活30分钟，然后再用稀释液稀释成1：4，1：8，1：16，1：32，1：64。
　　5.病毒—血清混合液将伪狂犬病活疫苗病毒液(200个TCID50/0.1ml)与上述不同稀释度待检血清分别等量混合，37℃水浴作用1小时以上。
　　6.接种细胞培养将已长成单层鸡胚纤维细胞的培养瓶，倾去营养液，接种病毒—血清混合液0.1ml和维持液0.9ml。每个稀释度接种4瓶，37℃培养。接种后24小时起观察细胞病变(CPE)，观察7日，记录结果。以不出现CPE数和接种数的比为中和比值。按Karber法计算中和效价。
　　7.乳胶凝集试验(LAT) 采用华中农业大学生产的猪伪狂犬病LAT诊断试剂盒，按其使用说明书检测待检血清LAT效价，记录结果。
　　二、结果
　　1.两批伪狂犬病活疫苗免疫40～50Kg健康敏感猪，免疫10天后血清中和抗体效价GMT分别为10、12；20天后血清中和抗体效价GMT分别为46、65.4。20天后血清中和抗体效价分别为10天的4.6倍和5.5倍。
　　2.两批伪狂犬病活疫苗免疫40～50Kg健康敏感猪，免疫10天后血清LAT效价GMT两批均为2.25；20天后血清LAT效价两批GMT分别为5、5.4。20天后血清LAT效价分别为10天的2.2倍和2.4倍。
　　三、讨论与小结
　　1.中和试验作为伪狂犬病抗体检测的经典方法，因具有特异性强，灵敏度、可靠性高等特点，被世界上许多国家列为伪狂犬病法定检测方法。在本试验中，伪狂犬病活疫苗免疫猪中和抗体效价免疫10天后均为8，全部转阳。20天后伪狂犬病血清中和抗体效价均≥31，抗体水平上升较快，升幅在4倍以上。
　　2.乳胶凝集试验(LAT)检测猪伪狂犬病抗体具有简便、快速，特异性较好等优点，其准确性相对来说差一些。两批疫苗免疫猪10天后血清伪狂犬病抗体全部转阳。20天后血清抗体升幅在2倍以上。
　　3.两种方法测定的血清伪狂犬病抗体效价并不完全一致。有的血清中和抗体效价较高，而LAT效价却较低。反之，有的血清中和抗体较低，而LAT却较高。两种方法测定结果并不完全相关。这可能与LAT检测抗体准确性相对来说要差一些有关。