饲料用抗氧化单制剂及饲料中抗氧化剂的检验

　(一)饲料用乙氧基喹啉的检验
　　1．中国医药行业标准法
　　此法适用于以对氨基苯乙醚和丙酮为主要原料合成的乙氧基喹啉(ethoxyquinline)。在饲料工业中，用作抗氧化添加剂。化学名称6-乙氧基-1，2-二氢-2，2，4-三甲基喹啉(6-ethoxy-1，2-dihydro-2，2，4-trimethyl
　　quinoline)，简称乙氧喹、乙氧基喹等。
　　(1)鉴别：黄褐色或褐色黏稠液体，稍有特殊气味。易溶于丙酮、异丙醇、乙醚、三氯甲烷、石油醚及正己烷，几乎不溶于水。遇空气或光颜色逐渐变深，但不影响使用效果。
　　(2)测定
　　①样液制备：称取试样约0.2g(精确至0.000 2g)于干燥具塞的三角瓶中，加30ml冰乙酸，使之溶解，另加lml乙酸酐。
　　②滴定：加1滴结晶紫指示液，用高氯酸标准滴定溶液(0.1mol／L)滴定至绿色，并将滴定结果用空白试验校正。
　　③分析结果计算：乙氧基喹啉含量以质量百分数表示，由下式给出：
　　X2=((V1-V2)×c×0.2173×100％)/m3
　　式中：V1--试样消耗高氯酸标准滴定溶液的体积(m1)；
　　v2--空白试验消耗高氯酸标准溶液的体积(m1)；
　　c--高氯酸标准滴定溶液的实际浓度(mol／L)；
　　m3--样品的质量(g)；
　　0.217 3--与lml高氯酸标准滴定溶液[c(HClO4)=0.100 0mol／L]相当的C14H19NO
　　的质量(g)。
　　所得结果应表示至1位小数(参见中华人民共和国医药行业标准 YY 0039-1991)。
　　2．美国饲料原料协会法
　　(1)原理：用石油醚将饲料样品中的乙氧喹及荧光法测定的物质提取，过滤；然后通过氧化铝柱层分离，洗脱乙氧喹，用荧光法测定。
　　(2)测定
　　①乙腈：荧光读数小于2，如大于2则需重蒸馏。
　　②乙氧喹标准系列(1h内新配)：配制0.5μg／ml、1μg／ml、2.5μg／ml的乙氧喹乙腈溶液。
　　③荧光仪：预热1.5h，用2μg ／ml硫酸喹宁校正仪器。
　　④用乙腈将仪器调零。
　　⑤滤光片：透过410～580nm。
　　(3)注意事项：含有乙氧喹的洗脱液，不宜使用太多；在旋转真空蒸发器上蒸干溶剂；避光操作。
　　(二)丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲酚(BHT)的鉴别
　　1．BHA的鉴别
　　在试样的乙醇溶液中加2m112％四硼酸钠溶液及2，6-二氯醌亚胺结晶数粒，应出现蓝色。取0.5％试样乙醇(50％)溶液5ml，加2ml三氯化铁溶液和2ml二
　　2，2-联吡啶溶液，应出现红色。
　　2．BHT的鉴别
　　取5ml试样，加入2.5ml乙醇，溶解后加入25ml水稀释，混匀，加2ml邻联二茴香胺溶液，摇匀加入0.8ml亚硝酸钠溶液混合，放置5min，加入0.5ml三氯甲烷，剧烈振摇半分钟放置分层，三氯甲烷层应呈品红色或红色。
　　(三)饲料中丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲酚(BHT)和乙氧喹(EQ)的测定
　　1．原理 样品中BHA、BHT、EQ用正己烷提取，离心分离后(必要时净化处理)，取上清液在气相色谱仪、FID定量测定。
　　2．测定
　　(1)提取：称取2g试样于l0ml刻度试管中，加入少许无水硫酸钠，加入5.0ml正己烷，加塞，在微型混合器上混合0.5min，在超声波处理槽内超声提取15min。以4000rpm离心2min，上清液为待测溶液。
　　(2)净化：如遇干扰待测组分的样品，需作氟罗里硅土柱净化处理，待测。
　　(3)分别取系列混合标准溶液和待测溶液，在气相色谱仪进行定量测定BHA、BHT、EQ(参见中华人民共和国国家标准GB／T17814-1999)。
　　(四)出口鱼粉中乙氧基喹含量的测定
　　1．原理 样品用甲醇和石油醚提取后，用荧光分光光度计测荧光强度，与标准比较
　　定量。本方法适用于出口鱼粉中乙氧基喹(ethoxyquin)的测定。
　　2．测定
　　(1)乙氧基喹标准溶液：精确称取l00mg乙氧摹喹于烧杯中，然后移入100ml容量瓶中，用石油醚溶解后并稀释至l00ml，此液每毫升相当lmg乙氧基喹。使用时，用石油醚制备成每毫升相当于0.5mg、lmg、1.5mg、2mg、2.5mg的乙氧基喹标准系列溶液。
　　(2)硫酸奎宁参比溶液：称取0.1g分析纯硫酸喹宁于1000ml
　　0.5mol／L的硫酸溶液中，吸取10ml此溶液，用0.05mol／L硫酸溶液稀释至1000ml，此溶液每毫升相当于lμg硫酸奎宁，作校正荧光计用。
　　(3)样品处理：称取10g样品于三角烧瓶中，加入50ml甲醇，摇动15min后，将样液过滤于250m1分液漏斗中，再用30ml甲醇，分2次洗涤三角瓶，滤液合并于分液漏斗中，加入100ml水，摇匀后，加人50ml石油醚，振摇lmin，静置分层。若发现乳化现象，可加入少量氯化钠，以使乳化消失。将下层水溶液移人另一个250m1分液漏斗中，再用石油醚提取2次，每次加入25ml石油醚，合并石油醚提取液，加入50ml水洗涤石油醚，将石油醚通过无水硫酸钠过滤于100ml容量瓶中，并稀释至刻度，作样品测定液。
　　(4)步骤：将样品测定液、试剂空白液以及每毫升相当于0μg、0.5μg、1μg、1.5μg、2μg、2.5μg的乙氧基喹标准系列，移入荧光分光光度计的石英杯中。以狭缝为9mm、365nm为激发光波长，以420～450nm波长进行荧光扫描。测定前用石油醚调节荧光分光计零点，再用硫酸奎宁液调节为100，然后进行样品液试剂空白和标准液的测定，所得荧光强度与标准乙氧基喹的荧光强度系列绘制标准曲线相比较，求出样品中乙氧基喹的含量(参见中华人民共和国农业行业标准lNY／T 46002-1987)。


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